多克隆抗体制备流程

动物免疫（宿主动物可提供兔、羊、鸡、小鼠）

设计实验方案

客户有特殊需求，需提供详细的实验要求

2-3工作日

免疫实验动物

分为三到四次免疫，Elisa检测即时效价

6-12周

微测Elisa检测

以免疫原为抗原样品，保证Elisa检测效价1：10000以上

1周

客户检测

自行设计检测方案

1周

合格，抗体及技术服务报告交付客户；不合格，服务停止；

单克隆抗体制备服务流程

第一阶段：免疫小鼠

设计实验方案

客户有特殊需求，需提供详细的实验要求

2工作日

免疫实验动物

5只6-8周龄BALB/C小鼠，Elisa检测即时效价

7-8周

Elisa检测

以免疫原为抗原样品，保证Elisa检测效价1：10000以上

1周

第二阶段：单克隆杂交瘤细胞株的建立

细胞融合

取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选阳性克隆

2-3周

克隆扩增和初选

扩增并低温保存一个成功融合的产物

1周

亚克隆

有限稀释法亚克隆至形成稳定的单克隆融合细胞株

4-6周

抗体鉴定（依据订单要求）

测定上清抗体亚型、特异性、抗体中和反应性及抗体配对参数

1-4周

腹水制备/转瓶培养

依据客户要求，提供不同种类服务

4-6周

抗体纯化

利用Protein A亲和纯化

1周

第三阶段：单克隆杂交瘤细胞株的验收

提供的杂交瘤培养物的腹水（或上清液）与顾客方提供的抗原样品有特异性结合，同时抗体特异性只针对客户方提供的抗原样品做出保证

第四阶段：单克隆杂交瘤细胞株的交付

2-3株杂交瘤细胞株和少量腹水（或上清液），需要纯化的订单会依据订单要求提供纯化后抗体，并给出相应的鉴定报告（包括单抗的亚型）

抗体纯化

抗原亲和纯化

使用抗原偶联Sepharose 4B制备抗原亲和纯化层析柱，仅捕获针对抗原的特异性抗体，纯化得到的抗体产物纯度高到90%以上，特异性强、灵敏度高，能明显减低背景信噪干扰，是抗体纯化中最佳的实验方法之一

1-2周

Protein A/G纯化

特异性的捕获样品中的IgG，性价比较高，特别适用于大规模样品的纯化

1-2周

饱和硫酸铵沉淀法纯化

分离所有的免疫球蛋白，得率最高，但特异性和灵敏度偏低，仅适用于定性分析

1周